乳铁蛋白的作用(蛋白乳铁片)

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笋３１卷：第６甥２０１１年６月光谱学与光谱分析ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａｌＡｎａｌｙｓｉｉＶ０１．３１，Ｎｏ．Ｒ．ｎｐｌ５３３—１５３６Ｉｕｖｎ，ｅｖ：２０１１拉曼光谱研究乳铁蛋白及其肽段与ＤＰＰＣ、ＤＰＰＧ脂质体的相互作用张伟１，任发政１，葛绍阳１’ ２，张录达３，姜鹭１，毛学英１，郭慧媛¨１．中国农业大学食品科学与营养＿１：程学院，教育邸功能乳品霞点实验室，北京１０００８３２．畜产品北京市高等学校工程研究中心．北京１００｛）８３３．中国农业大学理学院．北京１０００９４摘要利用拉曼光谱研究了乳铁蛋白及其肽段ＬａｃｔｏｆｅｒｒｃｉｎＢ｛。和Ｌａｃｔｏｆｅｒｒａｍｐｉｎ与ＤＰＰＣ、ＤＰＰＧ脂质体的相互作用。通过分析作用前后两种磷脂拉曼光谱的变化，探讨Ｙ＇－孚Ｌ铁蛋白及其肽段与磷脂的作用模式，为阐明乳铁蛋白及其肽段抗菌机理提供了黍要依据。拉曼光谱显示，乳铁蛋自及其肽段加入中性磷脂ＤＰＰＣ脂质体后，属于磷脂脂酰链的Ｃ —Ｈ对称、反对称伸缩振动的２８４７和２８８２ｃｍ。

１处的峰强没有发生明显改变；而当乳铁蛋白及其肽段与ＤＰＰＧ作ｊ。｝Ｊ后，２８８２ｃｍ１处的峰强度明显下降，磷脂的侧向相互作用序参数由未加入时的０．１９分别下降到ｒ０．１７，０．１４，０．１２，变化率分别为一１１％，一２７％，一３４％，表明乳铁蛋白及其肽段可能通过静电相瓦作用与负电性ＤＰＰＧ脂质体吸引并结合，且ＬａｃｔｏｆｅｒｒｃｉｎＢ４。和Ｌａｃｔｏｆｅｒｒａｍｐｉｎ比乳铁蛋白与磷脂的作用更为强烈。关键词拉曼光谱；乳铁蛋白；乳铁蛋白肽；脂质体；棚互作用中图分类号：（ｉ）６５７．３文献标识码：ＡＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００ —０５９３（２０１１）０６—１５３３—０４引言乳铁蛋白（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ，ＬＦ）是一种分子质量约为８０ｋＤａ的铁结合性糖蛋白，其广泛存在于哺乳动物的乳汁和各种分泌液中，具有广谱高效的抗菌活性。ＬａｃｔｏｆｅｒｒｃｉｎＢ４。

（Ｌｆｃｉｎｔ曳ｗ）和Ｌａｃｔｏｆｅｒｒａｍｐｉｎ（ＬｆａｍｐｉｎＢ）来源于牛源乳铁蛋白Ｎ端的两条肽段，是ＬＦ抗菌活性的核心序列［１” 。虽然ＬＦ及其肽段的抗菌活性已经得到了Ｊ“泛的研究和认可，似其抗菌机理还不明确，因此研究乳铁蛋白及其活性肽段！－ｊ细胞膜的相互作用，对阐明其抗菌机理有着重要的意义。近年来，｝ｌｉＩ内外学者利用多种手段研究药物或其他分子与生物膜的相互作用，如Ｘ射线衍射、电子自旋共振、核磁共振、圆二色谱、紫外和荧光光谱等．但这些方法均：品要商浓度的样品或是需要对目标分子进行光滑标ｉ已，操作过程复杂费时，不便于进行原位无损检测瞄】，而拉曼光谱在这一领域的应用弥补了以上｝段的不足。拉曼光谱由于其具彳ｒ实时、快速、无损等特点，已经在生物学、医学、食品科学等领域得到了广泛应用『６。８］。运用拉曼光谱技术研究生物？０ｉｌｌ：．物质与磷脂脂质体（模型生物膜）相互作用时，能准确的获得磷脂的反工℃（ｔｒａｎｓ）和扭曲（ｇａｕｃｈｅ）等构象信息以及磷脂分子的链内和链问序参数。

通过比较物质作用前后磷脂序参数的变化率，ｎ，以判断磷脂分子链内及链间相互作用的变化情况，从而得知脂质体磷脂分子的流动性和有序性的变化，以及物质‘亏脂质体的村ｊ瓦作用方式【“…ｌ。本文运月Ｊ拉曼光谱技术从分子水平研究了乳铁蛋白及其肽段‘ｊ模璎生物膜二棕榈酰磷脂酰胆碱（ＤＰＰＣ）、二棕榈酰磷脂酰甘油（ＤＰＰＧ）Ｊ］旨质体的相互作用，为阐明乳铁蛋白及其肽段的抗菌机理提供重要的依据，并为新型抗菌药物的设计提供思路。１实验部分１．１材料牛源乳铁蛋白购于Ｙｏｓｉｃａ公司，纯度９５％。ＬｆｃｉｎＢｕｌＨ（ＲＲＷＱＷＲＭＫＫＩ。Ｇ）、ＬｆａｍｐｉｎＢ（ＷＫＬＬＳＫＡＱＥＫＦＧＫＮＫ —ＳＲ）Ｉ｛Ｉｌ本实验室采用基于Ｆｍｏｃ保护和Ｗａｎｇ树脂的固相化学方法合成。合成后的多肽经液相色谱仪进行纯度分析，达到９５％以Ｅ，并通过ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析，鉴定其分子量。二棕榈酰磷脂酰胆碱（Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ—ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ＤＰＰＣ）、二棕榈酰磷脂酰眩油（ＤｉｐａｌｍｉｔｏｙＩ—ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃ一收稿日期：２０１０ —０６—２５。

修订日期：２０１００９ —２０基金项目：国家自然科学基金项目（３１０００７７１）和高等学校博１：学科点々项科研基金项１４（２０１００００８１２０００９）资助作者简介：张伟，１９８４年生，中国农业大学博士生ｅ－ｍａｉｌ：ＺＷ一７４３１＠１６３．ｔｏｍ＊通讯联系人ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｈｕｉｙｕａｎ９９＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ万方数据

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